Излечение сахарного диабета 1 типа в биореакторе захарова

Ниже представлена информация для специалистов, информация для пациентов в разделе: “Запись на прием”. Гарантии предоставляются только на качество медицинских процедур выполняемые в условиях стационара/дневного стационара в рамках лицензии на право медицинской деятельности.

Клеточная терапия при сахарном диабете 1 типа направлена на решение двух важных задач:

• репрограммирование клеток иммунной системы для предотвращения разрушительного действия на В-клетки;
• восстановление общего пула дееспособных В-клеток.

Клеточные технологии применяемые для терапии СД 1 типа существуют разные. Применяют как аутологичные (собственные) стволовые клетки, так и донорские. Кроме того могут использоваться персонифицированные клеточные препараты из компонентов крови (экзосомы).

По источнику происхождения стволовые клетки

могут быть мобилизованы ГСК (гемопоэтические стволовые клетки) из периферической крови. На видео автору метода терапии сахарного диабета 1 типа (Патент РФ) Захарову Ю.А., проводится мобилизация ГСК для последующей трансплантации.

А также МСК (мезенхимальные стволовые клетки) могут быть мобилизованы из собственной/донорской жировой ткани с последующей обработкой в лабораторных условиях и трансплантацией.

Стволовые клетки для терапии сахарного диабета 1 и 2 типов успешно применяются уже более пяти лет. Существует большое количество научных публикаций, которые показывают достижение стойкой ремиссии свыше трех лет без применения заместительной терапией препаратов инсулина.

Просто введение стволовых клеток/выращенных В-клеток не приводит к излечению диабета, но способствует ремиссии от 2 до 6-и месяцев. В моно-варианте трансплантация стволовых клеток приводит только к улучшению показателей углеводного обмена, но в комплексном лечении приводит к длительной (более 3-х лет) ремиссии заболевания без инсулинотерапии. Для терапии применяют разные технологии и источники получения материала и введения. Разные типы стволовых клеток. В настоящее время признаны безопасными:

МЕЗЕНХИМАЛЬНЫЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА 1 ТИПА

используются собственные (аутологичные и донорские). Успешно применяются в любом возрасте. Курс терапии предполагает 4 введения в течение месяца, процедура проводится в условиях дневного стационара, госпитализация не требуется.

МЕЗЕНХИМАЛЬНЫЕ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА 1 ТИПА Метод имеет возрастные ограничения (после 18-ти лет), это связано с особенностью процедуры забора материала выполняется строго в стационарных условиях в течение 7-и дней. Алгоритм введения индивидуальный 1-3 раза в год в условиях стационара.

СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ ПУПОВИННОЙ КРОВИ И АМНИОТИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ

Метод ограничен особенностью типа клеток и количеством.

Между тем, помимо стандартного биологического подхода репрограммирования иммунной системы с помощью классической инвазивной клеточной терапии существует два принципиально новых подхода, основанных на иных физических принципах:

Репрограммирование клеток до достижения «стволовости» за счет «геометрических ограничений» www.pnas.org/content/115/21/E4741

и так называемого «эффекта формы»

www.pnas.org/content/115/21/E4741

ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ИЗЛЕЧЕНИЕ ДИАБЕТА 1 ТИПА

Обложка июльского выпуска журнала «STEM CELLS» от июля 2017 года «The Medical Medicine» демонстрировала последнее достижение к функциональному излечению инсулинзависимого диабета. Ученые из SymbioCellTech (SCT), небольшой биотехнологической компании в Солт-Лейк-Сити, разработали технологию, которая объединяет мезенхимальные стволовые клетки (MSC) с культивируемыми клетками островковых клеток поджелудочной железы с образованием трехмерных клеточных кластеров, называемых «неоостровками». Однократная доза неоостровков, вводимая в брюшную полость, обеспечивает прочный контроль сахара в крови, освобождая от зависимости к экзогенному инсулину.

stemcellsjournals.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/sctm.17-0005

КЛЕТОЧНЫЙ СИГНАЛЛИНГ ПРИ ОБРАЗОВАНИИ В – КЛЕТОК

Во время развития клетки размножаются и дифференцируются, чтобы органы могли достичь своей окончательной функциональной архитектуры. По мере того как клетки развиваются, чтобы достичь своего зрелого состояния, они реагируют на различные внешние сигналы, обеспечиваемые окружающим микроокружением, и приобретают судьбу, которая может быть определена их расположением в ткани. Но мало что известно о том, как эти сигналы приводят к внутриклеточным изменениям, таким как транскрипция или дифференцировка, или как тканевая архитектура и клеточные перестройки могут, в свою очередь, влиять на судьбу клетки. Статья дает представление о том, как местоположение ячейки и воздействие определенных внешних сигналов могут влиять на то, создают ли клетки в развивающейся поджелудочной железе β-клетки, которые делают белковый инсулин. Недостатки в клетках, продуцирующих инсулин, могут привести к диабету, поэтому лучшее понимание того, как эти формы клеток могут иметь клинические последствия.

www.nature.com/articles/d41586-018-07490-y?fbclid=IwAR0YA9W57cAgL_kWPxccV95C4he3bBKLlmkwqDP1koWc2iCta8mNAK5LFOw

Иммунорепеллентный белок улучшает выживаемость и функции трансплантированных островков поджелудочной железы

Инкапсуляция бета-клеток, полученных из стволовых клеток, в микрокапсулы, содержащие белок, отражающий атаки иммуноцитов, восстанавливает метаболизм глюкозы у мышей с диабетом и защищает клетки трансплантата от атак иммунной системы, предотвращая накопление воспалительной фиброзной ткани, которая мешала предыдущим испытаниям инкапсулированных бета-клеток.

Инкапсулированные островки восстанавливали длительный контроль сахара в крови у животных, и было показано, что присутствие CXCL12 отталкивает Т-клетки, связанные с процессом отторжения трансплантата, в то же время привлекая регуляторные Т-клетки, которые могут подавлять иммунный ответ в месте трансплантации.В настоящем исследовании использовались инсулин-продуцирующие бета-клетки, полученные из плюрипотентных стволовых клеток человека. Эти человеческие бета-клетки инкапсулировали либо с низким, либо с высоким уровнем CXCL12 перед трансплантацией мышам с диабетом. Животные не получали иммунодепрессантов в течение всего периода исследования.Высокий уровень этого иммунорепеллентного белка был ассоциирован с большей сохранностью функции бета-клеток выделять инсулин, стабилизируя уровень глюкозы крови, в то время как низкий уровень был ассоциирован с отторжением трансплантата и отсутствием терапевтического эффекта. dx.doi.org/10.1111/ajt.15308

Терапия стволовыми клетками достигла наиболее перспективных результатов в сравнении с применением стандартных иммунодепрессантов.

www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28260183

На схеме показаны этапы подготовки клеточного материала (МСК) перед трансплантацией пациенту. Сеансы в самой современной и безопасной барокамере помогают организму адаптироваться после клеточной трансплантации и быстрее восстановиться.

Более подробно узнать о новых подходах к клеточной терапии стволовыми клетками в диабетологии можно в книге Юрия Захарова (заказать печатную книгу, электронную версию): https://ridero.ru/books/lechenie_sakharnogo_diabeta_stvolovymi_kletkami/

ПРИМЕЧАНИЕ: Видеоизображения (интервью), ссылки на научные публикации размещены на сайте для СПЕЦИАЛИСТОВ и не предназначены для пациентов, во избежание необоснованной мотивации к использованию подобных технологий. Имеются строгие показания и противопоказания. Обязательна консультация с лечащим врачом и проведение межклинического консилиума.

Источник

Статья на конкурс «Био/Мол/Текст»: В 2020 году биоинженеры разработали гибридный пластырь, который уравновешивает действие инсулина и глюкагона, не требует контроля человека и не причиняет боли при использовании. Как он работает и есть ли у пластыря недостатки?

Конкурс «Био/Мол/Текст»-2020/2021

Эта работа опубликована в номинации «Свободная тема» конкурса «Био/Мол/Текст»-2020/2021.

Генеральный партнер конкурса – ежегодная биотехнологическая конференция BiotechClub, организованная международной инновационной биотехнологической компанией BIOCAD.

Спонсор конкурса – компания SkyGen: передовой дистрибьютор продукции для life science на российском рынке.

Спонсор конкурса – компания «Диаэм»: крупнейший поставщик оборудования, реагентов и расходных материалов для биологических исследований и производств.

«Книжный» спонсор конкурса – «Альпина нон-фикшн»

По данным ВОЗ, в 2014 году насчитывалось 422 млн пациентов с диагнозом «сахарный диабет». В течение последних 34 лет рост числа пациентов был непрерывен, поэтому сегодня число заболевших может приближаться к полумиллиарду (рис. 1). До сих пор у нас нет не только методов лечения самых распространённых типов сахарного диабета, но и эффективных способов борьбы с его симптомами – последствиями избытка глюкозы в крови (гипергликемией) . Проявления частой гипергликемии начинаются с упадка сил и нарушений сна, а заканчиваются утратой остроты зрения у 90% диабетиков, омертвением тканей ног, нарушениями работы почек, сердца и мозга. Чтобы миллионы людей могли оставаться активными как можно дольше, важно разрабатывать новые способы регулировать уровень глюкозы в крови.

Рисунок 1. По данным ВОЗ, в 2014 году людей с сахарным диабетом было около 422 миллионов. Ускоряется рост их числа в странах с бедным и небогатым населением, как свидетельствует график в нижней части рисунка. Судя по тому, что рост не прекращается, сегодня людей с диабетом в мире может быть уже около 500 миллионов.

Что не учитывают, пытаясь помочь человеку с диабетом?

У каждого из нас при переваривании пищи большие порции глюкозы всасываются в кровь: возникает кратковременная гипергликемия, но в ответ на неё почти моментально секретируется инсулин. К тому времени он уже синтезирован бета-клетками островков Лангерганса (особых групп клеток внутри поджелудочной железы, секретирующих гормоны). Из-за увеличения концентрации глюкозы возникает последовательность сигналов внутри бета-клеток, что запускает секрецию готового к подвигам инсулина. Он снижает уровень глюкозы, стимулируя ее поглощение из крови. У больных диабетом обычно выделяется недостаточное для нормальной регуляции сахара в крови количество инсулина.

Но даже грамотная диета и постоянные инъекции инсулина не спасают от осложнений сахарного диабета и их последствий – смертей. Проблема в том, что назначаемые дозы инсулина часто несоразмерны ситуации. И если инсулина становится слишком много, наступает гипогликемия. В норме уровень глюкозы повышается глюкагоном, но часто при нарушении работы бета-клеток островков Лангерганса, секретирующих инсулин, ломаются и соседние альфа-клетки, производящие глюкагон [4-6]. Если выделяется недостаточно глюкагона, то во время резкого падения концентрации глюкозы (после щедрой инъекции инсулина, например) первым отключается остро зависимый от нее мозг. Так начинается гипогликемическая кома. Если же глюкагона секретируется избыточное количество, то гипергликемия будет только тяжелее, чем без его вмешательства – печень, стимулируемая глюкагоном, будет дополнительно вбрасывать глюкозу в кровь. Первая рекомендация человеку с диабетом – соблюдение специальной диеты и регулярное питание, чтобы сгладить колебания уровня сахара и других веществ путем контроля за их поступлением извне. Однако при нарушениях секреции глюкагона одной диеты недостаточно. Это связано с тем, что печень будет выделять глюкозу в кровь в ответ на выброс глюкагона независимо от поступления веществ из пищеварительной системы, а значит, наши возможности внешнего контроля здесь ограничены.

Если противодействовать сахарному диабету инъекциями инсулина догадались век назад, то о катастрофическом эффекте связи соседних клеток островков Лангерганса между собой сообщили только в 1970-е годы; активно изучать инсулин начали на рубеже веков, однако многое до сих пор остается неизвестным. Сейчас инсулин готовы прописать каждому пациенту с диабетом, но этого часто недостаточно. Необходимы саморегулирующиеся системы, которые выделяют в организм гормоны с противоположным друг другу действием в ответ на изменения концентрации глюкозы. Идеально, если такие системы будут удобными в использовании и безболезненными, вроде пластыря: прилепил и пошел (рис. 2) [7].

Рисунок 2. Фотография пластинки чувствительного к глюкозе пластыря с инсулином в микроиглах высотой 700 мкм

Реализовать идею гибридного пластыря решили ученые из Лос-Анджелеса: они создали пластырь, который искусно противодействует проявлениям диабета [8]. Коллеги Зэцзюнь Ван и Цзиньцян Ван, работающие в Калифорнийском университете, уже патентуют свою разработку. Ради будущего, в котором человеку с диабетом для полноценной жизни взамен постоянных проверок крови на сахар и уколов или автоматических дозаторов инсулина нужен лишь пластырь, хочется жить. В статье мы расскажем о принципах работы нового пластыря и его преимуществах по сравнению с другими способами регулирования уровня глюкозы.

Изготовление и работа гибридного пластыря

Регуляция высвобождения гормонов невозможна без постоянного контакта с внутренней жидкой средой организма. На поверхности пластыря, прилегающего к коже, расположены сотни так называемых микроигл – под микроскопом они выглядят как вытянутые вверх пирамидки высотой меньше миллиметра (рис. 3) [7].

Ширина оснований игл – 300 микрометров – приблизительно равна диаметру самых тонких, безболезненных игл, которыми делают микроинъекции при контурной пластике. На фоне же обычных игл шприцов микроиглы выглядят как пассажиры Боинга 747 на фоне самолета (рис. 4А). Однако размеры (их длина 700 мкм) позволяют микроиглам проникать в живую ткань кожи – дерму (рис. 4Б) [9]. Находясь в контакте с межклеточной жидкостью дермы, они воспринимают изменения концентрации глюкозы, которые соответствуют изменениям в плазме крови. При этом микроиглы не раздражают болевые рецепторы, залегающие глубже, что делает применение пластыря безболезненным.

Рисунок 4а. Сравнение микроигл аналогичного пластыря с иглой для инъекций.

Рисунок 4б. Микроиглы в дерме. Микроиглы достают до дермы (изображена бледно-розовым цветом) и могут выделять вещества в ответ на различные изменения в межклеточной жидкости (это могут быть изменения кислотности, температуры, химических реакций, уровня сахара, активности некоторого фермента). Выделение инсулина и глюкагона зависит от уровня сахара.

В форме микроигл застыл полимеризованный матрикс – сеть молекул, в которой скрыты гормоны. Тесная связь всех компонентов способствует взаимодействиям между содержимым пластыря и глюкозой, чтобы постоянно регулировать постепенное высвобождение гормонов, а не выделять все активные вещества за один раз. С переходом воды из дермы компоненты начинают взаимодействовать между собой: они притягивают молекулы гормона или, наоборот, позволяют им активно растворяться, удерживая их слабее. Инсулин активно высвобождается в ответ на повышение уровня глюкозы в межклеточной жидкости; глюкагон выходит из своих игл при снижении сахара (рис. 5).

Рисунок 5а. Наглядная схема саморегуляции. При повышении концентрации глюкозы (желтые пятиугольники) изменяется заряд матрикса (голубые линии). Благодаря этому матрикс слабее удерживает молекулы инсулина; инсулин (зеленые кружочки) выходит из матрикса. С глюкагоном всё происходит с точностью до наоборот.

Рисунок 5б. Изменение заряда фрагмента молекулы матрикса (фенилбороновой кислоты) на биохимическом уровне. До связывания с молекулой глюкозы фрагмент не был заряжен; в процессе связывания он обретает отрицательный заряд. Из-за отрицательного заряда молекулы инсулина слабее удерживаются в матриксе и начинают высвобождаться из него.

Критика

Идея нового гибридного пластыря хороша, однако ей далеко до практического применения: пока все результаты были получены на мышах; впереди – совершенствование технологии и клинические испытания. Нужно ли это, если уже сейчас широко применяются довольно продвинутые автоматические дозаторы инсулина – так называемые инсулиновые помпы? Дозаторы сообщаются с подкожной клетчаткой человека с помощью гибких катетеров, которые постоянно измеряют уровень сахара и при его повышении впрыскивают инсулин в растворенной форме (рис. 6). Мы решили сравнить действие пластыря и помпы, чтобы понять, насколько эффективна новая система на фоне уже существующих, и вообще критически оценить ее.

Рисунок 6а. Сенсор, измеряющий уровень сахара, регулирует введение инсулина.

Рисунок 6б. Части инсулиновой помпы. Помпа – устройство с монитором, стеклянная ёмкость для инсулина, трубки и канюли – система доставки инсулина в организм.

Прежде всего, помпы регулируют только уровень инсулина, никак не компенсируя частые нарушения секреции глюкагона. И лучшее, что хорошая помпа может сделать, когда нужен глюкагон – просто отключиться и не вмешиваться. (Это запрограммировано на случай резкой гипогликемии во сне – когда человек не может отреагировать, съев «рафаэлку»). Конечно, регуляция уровня глюкозы в крови с помощью пластыря, который выделяет гормоны для уравновешивания резкости действий друг друга, оказывается более сбалансированной, чем действие системы, которая выделяет лишь один из гормонов (рис. 7). К слову, исследователи экспериментировали с пластырями, в которых микроиглы содержали только один гормон – результат каждый раз выходил менее удачным, чем у гибридного варианта [8]. Кроме того, дозатор помпы может сломаться и тем самым навредить здоровью человека. Пластырь же настолько прост по своему устройству, что лишен таких рисков.

Рисунок 7. Высвобождение гормона из микроигл уравновешивает эффекты антагониста при избытке в крови последнего. При повышении уровня глюкозы высвобождается инсулин, при понижении – глюкагон.

Не будем забывать и о качестве жизни людей с диабетом. Даже помпа – передовая технология – снижает качество жизни: постоянно введенный катетер ограничивает возможности передвижений. О пластыре человеку гораздо легче забыть на весь день. Для полного комфорта осталось только защитить пластырь от поступления воды извне, чтобы пациент мог принимать душ или плавать, не боясь того, что контакт пластыря с водой может привести к сбоям в выделении гормонов из микроигл.

Однако радость от новой технологии не помешает рассмотреть ее недостатки. И главным из них кажется кратковременность эффективного действия пластыря в экспериментах. Ученые тестировали систему, чередуя экстремально высокие и низкие уровни сахара, и сообщили, что пластырь нормально работает в течение трех таких циклов-чередований. Однако, как видно из графиков, уже после полутора циклов (т.е. после трех перемен условия), высвобождается значительно меньше гормонов, чем в начале (рис. 8). Условно можно приравнять такой цикл ко времени между приемами пищи. Таким образом, из экспериментов следует, что пластырь эффективно работает не более половины дня, а дальше его эффективность может уменьшаться из-за снижения объема выделяемых гормонов. Однако в экспериментах концентрация глюкозы менялась в 8 раз – в действительности у пациентов с диабетом колебание уровня сахара в крови значительно меньше, поэтому одного пластыря вполне может быть достаточно на весь день.

Помпа же уступает пластырю тем, что использует растворенный инсулин, и его срок хранения относительно короткий. В микроиглах пластыря до его применения гормоны находятся в сухом состоянии: в таком виде они хранятся достаточно долго и без особых условий.

Рисунок 8. Изменение количества выделяемого микроиглами гормона в зависимости от частоты перепадов концентрации глюкозы. Инсулин – слева, глюкагон – справа. Голубым цветом обозначено количество выделенных гормонов при повышении сахара, серым цветом – при понижении. Каждый раз при повышении уровня глюкозы выделяется больше инсулина и меньше глюкагона; при понижении уровня глюкозы – больше глюкагона и меньше инсулина. Первые три столбика на каждой диаграмме значительно отличаются по высоте от других схожих с ними по цвету, то есть количество гормонов, высвобождаемое в одних и тех же условиях, в процессе использования быстро снижается. Возможно, это значит, что пластыря будет хватать ненадолго: если принять цикл повышения-снижения сахара (два соседних столбика) к циклу, который наш организм проходит между приёмами пищи, окажется, что пластыря будет хватать всего на половину дня.

Огорчает и то, что все же коже необходимо время на восстановление после такого пластыря с микроиглами (рис. 9). Предварительная рекомендация: применять пластырь стоит не чаще раза в неделю на одном месте. Правда, основана она на том, что после использования одного пластыря за неделю воспаление, заметное в первый и третий день после применения, сходит на нет (в другие дни исследователи наблюдений не делали). Однако не сообщается, что будет спустя несколько повторений.

Рисунок 9а. Микроигла в коже и след от нее. Слева: кончик микроиглы в коже мини-пига с индуцированным диабетом достает до дермы. Справа: небольшое повреждение кожи мини-пига, оставшееся после извлечения микроиглы. Фотографии сделаны с помощью светового микроскопа; срез окрашен гематоксилином и эозином, масштаб 200 мкм

Рисунок 9б. Состояние эпидермиса мини-пига с индуцированным диабетом приближается к таковому у здорового животного в результате использования пластыря с микроиглами в течение 14 дней. Слева направо: нормальный эпидермис (normal), изменения эпидермиса мини-пига с диабетом один день спустя (day 1), семь дней спустя (day 7) и две недели спустя (day 14) после использования пластыря. Фотографии сделаны с помощью светового микроскопа, срез окрашен гематоксилином и эозином, масштаб 400 мкм

Похожие на новую разработку пластыри с микроиглами уже применялись для безболезненной вакцинации, но это воздействие было однократным (рис. 10). Впрочем, радует проверенная безвредность веществ, составляющих бесследно растворяющийся матрикс микроигл. А менять участки тела в любом случае приходится всем пациентам: и тем, кто пользуется инъекциями, и тем, кто пользуется дозаторами.

Рисунок 10. Вакцинация с помощью пластыря с микроиглами. Так может выглядеть и применение гибридного пластыря.

Подводя итоги, хочется сказать, что гибридный пластырь с микроиглами кажется потенциально куда более простым в использовании, чем все прежние способы регулирования уровня глюкозы в крови у людей с диабетом. Однако надеемся, что это просто очередная остановка, на которой мы пережидаем время для появления доступных лекарственных препаратов, воздействующих на саму причину диабета: нарушения работы или гибель бета-клеток, секретирующих инсулин.

1. Сахарный диабет I типа, или Охота на поджелудочную железу;
2. Кровавая драма на островке Лангерганса, или Как новооткрытая химера T- и В-клеток подстрекает аутоиммунный ответ при диабете I типа;
3. Кардиопротекция при сахарном диабете;
4. Jesper Gromada, Pauline Chabosseau, Guy A. Rutter. (2018). The α-cell in diabetes mellitus. Nat Rev Endocrinol. 14, 694-704;
5. Gina L.C. Yosten. (2018). Alpha cell dys in type 1 diabetes. Peptides. 100, 54-60;
6. Walter A. Müller, Gerald R. Faloona, Eugenio Aguilar-Parada, Roger H. Unger. (1970). Abnormal Alpha-Cell in Diabetes. N Engl J Med. 283, 109-115;
7. Jicheng Yu, Jinqiang Wang, Yuqi Zhang, Guojun Chen, Weiwei Mao, et. al.. (2020). Glucose-responsive insulin patch for the regulation of blood glucose in mice and minipigs. Nat Biomed Eng. 4, 499-506;
8. Zejun Wang, Jinqiang Wang, Hongjun Li, Jicheng Yu, Guojun Chen, et. al.. (2020). Dual self-regulated delivery of insulin and glucagon by a hybrid patch. Proc Natl Acad Sci USA. 117, 29512-29517;
9. Rezvan Jamaledin, Pooyan Makvandi, Cynthia K. Y. Yiu, Tarun Agarwal, Raffaele Vecchione, et. al.. (2020). Engineered Microneedle Patches for Controlled Release of Active Compounds: Recent Advances in Release Profile Tuning. . Therap.. 3, 2000171;
10. Mina Rajabi, Niclas Roxhed, Reza Zandi Shafagh, Tommy Haraldson, Andreas Christin Fischer, et. al.. (2016). Flexible and Stretchable Microneedle Patches with Integrated Rigid Stainless Steel Microneedles for Transdermal Biointerfacing. PLoS ONE. 11, e0166330.

Источник